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Y190酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

Y190酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

簡(jiǎn)要描述:

Y190酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞:是GAL4系統(tǒng)酵母雙雜交用實(shí)驗(yàn)菌株,MATa型,能直接轉(zhuǎn)化質(zhì)?;蚺cMATα型酵母菌株Y187通過接合(mating)操作進(jìn)行蛋白相互作用驗(yàn)證或篩庫實(shí)驗(yàn)。轉(zhuǎn)化標(biāo)志為trp1,leu2,cyh2。報(bào)告基因?yàn)閘acZ,HIS3,MEL1。

產(chǎn)品時(shí)間:2024-03-20

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Y190 Chemically Competent Cell

酵母菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

溫馨提示

見我司(懋康生物)整理的酵母雙雜交(Yeast two-hybrid assay產(chǎn)品專題。

 

產(chǎn)品關(guān)鍵詞:

Y190-GAL4酵母單雜交系統(tǒng);Y1HGold;pGBKT7;pGADT7;Ar Qual;X-α-GalAureobasidin A AbA);金擔(dān)子素;

 

產(chǎn)品訂購:

貨號(hào)

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

價(jià)格(元)

MF2364-1000UL

Y190 Chemically Competent Cell 酵母菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

10×100μl

290

MF2364-5000UL

Y190 Chemically Competent Cell 酵母菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

50×100μl

1320

 

產(chǎn)品組分:

組分編號(hào)

組分名稱

保存

貨號(hào)(規(guī)格)

MF2364-1000UL

MF2364-5000UL

MF2364-A

Y190 Chemically Competent Cell

-80

10×100μl

50×100μl

MF2364-B

pGADT7 Control Vector (10ng/μl)

-80

10μl  

10μl  

MF2364-C

Carrier DNA (10μg/μl)

-20

100μl 

500μl 

MF2364-D

PEG/LiAC Solution

+4

5ml

25ml

 

產(chǎn)品描述

Y190GAL4系統(tǒng)酵母雙雜交用實(shí)驗(yàn)菌株,MATa型,能直接轉(zhuǎn)化質(zhì)?;蚺cMATα型酵母菌株Y187通過接合(mating)操作進(jìn)行蛋白相互作用驗(yàn)證或篩庫實(shí)驗(yàn)。轉(zhuǎn)化標(biāo)志為trp1,leu2,cyh2。報(bào)告基因?yàn)?/span>lacZ,HIS3,MEL1。Y190-GAL4酵母雙雜交系統(tǒng)需要兩種質(zhì)粒配套使用,pGB&pACT2pGBKT7& pGADT7。pGB由或pGBKT7改造而來,篩選標(biāo)志為Trp,用于表達(dá)DNA-BD與誘餌蛋白(bait)的融合蛋白;pACT2pGADT7的結(jié)構(gòu)和功能類似,篩選標(biāo)志為Leu,用于表達(dá)AD與誘捕蛋白(prey)的融合蛋白。

本品為經(jīng)特殊工藝制備的Y190酵母菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞,用pGADT7質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>104cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存三個(gè)月。

基因型

MATa, ura3-52, his3-200, ade2-101, lys2-801, trp1-901, leu2-3, 112, gal4Δ, gal80Δ, cyhr2, LYS2 : : GAL1 UAS-HIS3TATA-HIS3, MEL1 URA3 : : GAL1UAS-GAL1TATA-lacZ

注意事項(xiàng)

  1. 號(hào)在冰上融化感受態(tài)細(xì)胞。
  2. 轉(zhuǎn)化高濃度質(zhì)??上鄳?yīng)減少用于涂板的菌量。同時(shí)轉(zhuǎn)化2-3種質(zhì)??蛇m當(dāng)增加質(zhì)粒的用量。
  3. Y190對(duì)高溫敏感,適生長(zhǎng)溫度為27-30℃,一旦高于31℃,生長(zhǎng)速度和轉(zhuǎn)化率都呈指數(shù)下降。
  4. 菌落變粉紅色并不是污染,而是酵母細(xì)胞生長(zhǎng)中的一種常見現(xiàn)象。當(dāng)酵母細(xì)胞在平板上培養(yǎng)幾天,將平板內(nèi)的腺嘌呤消耗殆盡,那時(shí)酵母試圖通過自身代謝途徑合成腺嘌呤以供利用。然而,某些菌株ADE2基因被破壞,腺嘌呤合成受阻。且ADE4,5,6,7,8基因均正常。由此,造成中間產(chǎn)物P-ribosylamino imidazoleAIR)在細(xì)胞的積累使得菌落變?yōu)榉奂t色。
  5. 酵母菌在缺陷培養(yǎng)基上生長(zhǎng)速度比YPDA培養(yǎng)基慢,營(yíng)養(yǎng)缺陷成分越多,生長(zhǎng)越慢,以轉(zhuǎn)化涂板為例:涂YPDA平板于29℃,48h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆;涂SD單缺平板于29℃,48-60h培養(yǎng)可見直徑1mm克??;涂SD雙缺平板于29℃,60-80h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆;涂SD三缺或四缺平板于29℃,80-90h培養(yǎng)可見直徑1mm克??;
  6. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用方法

  1. Carrier DNA于使用前通過加熱處理使其變性為單鏈狀態(tài),方法如下:95-100 水浴或金屬浴3min,快速插入冰中,靜置3min。重復(fù)一次。
  2. 100 µl冰上融化的Y190化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞,依次加入預(yù)冷的目的質(zhì)粒0.5-3 µg,單鏈Carrier DNA 10 µlPEG/LiAc 500µl,用槍吹打幾次充分混勻,30水浴30 min(在15min時(shí)翻轉(zhuǎn)6-8次混勻)。
  3. 之后將管子放42水浴15 min(在7.5min時(shí)翻轉(zhuǎn)6-8次混勻)。
  4. 5000 rpm離心40s棄上清,用400 µl ddH2O重懸沉淀,離心30s棄上清。
  5. 50 µl ddH2O重懸,涂板,放入29培養(yǎng)48-96 h

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

 

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品與實(shí)驗(yàn)服務(wù)工作,主要從事細(xì)胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承以人為本,以誠(chéng)為信、合同守信的經(jīng)營(yíng)理念。堅(jiān)持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。

 

Y190酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

Y190酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

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